Research on Animal Production

fa جداسازی، شناسایی و کشت سلول‌های بنیادی مزانشیمی مشتق از بافت چربی مرغ تخم‎گذار Isolation, Identification and Cultivation of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Laying Hens فیزیولوژی فیزیولوژی پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">چکیده مبسوط مقدمه و هدف: امروزه شدت و سرعت تولید در مرغان تخم گذار باعث بروز ناهنجاری&lrm;های متعدد از جمله مشکلات استخوانی و اسکلتی ‌شده است که زیان اقتصادی سنگینی را به&lrm;دنبال دارد. انجام مطالعات روی سلول‌های بنیادی استحصال شده از مرغان تخم&lrm;گذار می‌تواند باعث بهبود شناخت و درک ما از مکانیسم‌های تمایزی و مولکولی در سطح سلولی در این پرندگان شود. به&lrm;همین منظور هدف از این مطالعه، استحصال سلول&lrm;های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی مرغان تخم گذار و کشت این سلول‌ها در شرایط آزمایشگاهی بود. مواد و روش‌&rlm;ها: در این تحقیق، سلول&lrm;های بنیادی مزانشیمی طی شرایط استریل در محیط آزمایشگاه از بافت چربی احشایی مرغان تخم&lrm;گذار (سویۀ های&lrm;لاین w-36) جداسازی شد. سپس در شرایط محیط کشت استاندارد، سلول‌های موردنظر به&lrm;وسیله تیمار با آنزیم کلاژناز از سایر سلول‌ها جدا شده بود. سلول&lrm;های استحصال شده پس از چند ‌بار سانتریفیوژ کردن و خالص&lrm;سازی، در محیط کشت DMEM-F12 حاوی سرم جنین گاوی 10% کشت داده شد. در طول 21 روز، برای بررسی عملکرد سلول‌های جدا شده و توانایی رشد و تکثیر سلولی، روند رشد سلول&lrm;ها و چگونگی تشکیل کلنی سلولی مورد ارزیابی قرار گرفت. سلول‌ها تا 14 بار با مورفولوژی طبیعی پاساژ داده شدند. برای بررسی سرعت رشد سلول‌ها این آزمون در پاساژهای 2، 4 و 8 تکرار شد تا کاهش توانایی رشد سلول‌ها با افزایش سن، مورد بررسی قرار گیرد. یافته&lrm;ها:  حدود 3 الی 4 روز بعد از کشت، سلول‌های چسبیده 70-80 درصد فلاسک را پر کردند. میانگین روند رشد سلول&lrm;ها در پاساژهای 2، 4 و 8 به ترتیب برابر 37/03، 60/92 و 101/42 درصد که نشان دهنده ارتباط، توانایی تکثیر و خود نوسازی سلول‌های بنیادی با سن آنها بود. بعد از گذشت 9 روز از کشت سلولی، تعداد کلنی&lrm;های تشکیل شده از سلول‌های حاصل از پاساژهای 2 و 5 با غلظت‌های 175، 350 و 520 سلول در هر سانتی&lrm;متر مربع پلیت 6 خانه&lrm;ای به&lrm;ترتیب برابر با 22، 62 و 84 کلنی بود. نتیجه&lrm;گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که سلول‌های بنیادی مزانشیمی استحصال شده از بافت چربی مرغان تخم&lrm;گذار، توانایی حفظ خصوصیات بنیادی خود در طی تقسیمات سلولی متعدد را دارند و می&lrm;توانند ساختار مورفولوژیکی و خصوصیات خاص خود از جمله عملکرد مربوط به رشد را حفظ نمایند. </div> <div style="text-align: justify;"> <div style="text-indent: -0.5pt;">Extended Abstract </div> <div>Background: Today, the intensity and speed of production in laying hens cause multiple anomalies, such as bone and skeletal problems, which lead to significant economic losses. Conducting studies on stem cells obtained from laying hens can enhance our understanding of the differentiation and molecular mechanisms at the cellular level in these birds. For this reason, the aim of this study was to extract mesenchymal stem cells from the fat tissue of laying hens and culture these cells under laboratory conditions. Methods: In this research, mesenchymal stem cells were isolated in a laboratory environment under sterile conditions from the fat tissue of laying hens (Hy-Line strain W36). Under standard culture conditions, the cells were separated from other cells by treatment with collagenase enzyme. The obtained cells, after several steps of centrifugation and purification, were cultured in DMEM-F12 medium containing 10% fetal bovine serum. Over 21 days, the cell growth process (population doubling time, PDT) and cell colony formation tests were performed to evaluate the performance of the isolated cells and their ability to grow and proliferate. Results: About 3 to 4 days after culturing the cells, the adherent cells filled 70-80% of the flask. Cells were passaged up to 14 times while maintaining normal morphology. To assess the speed of cell growth, this test was repeated in passages 2, 4, and 8 to investigate the decrease in the ability of cells to grow with increasing passage number. The average cell growth rate (PDT) for passages 2, 4, and 8 was 37.03%, 60.92%, and 101.42%, respectively, indicating a relationship between the stem cells' ability to reproduce and self-renew and their age. After 9 days of cell culture, the number of colonies formed from passages 2 and 5, with concentrations of 175, 350, and 520 cells per 2 cm² in 6-well plates, were counted as 22, 62, and 84, respectively. Conclusion: The results of this research showed that mesenchymal stem cells extracted from the fat tissue of laying hens can maintain their basic characteristics during multiple cell divisions, preserving their morphological structure and specific characteristics, such as growth-related functions.</div> <div></div> </div> بافت‌چربی, سلول بنیادی مزانشیمی, کشت سلولی, مرغ تخم‎گذار Bone differentiation, Genistein, Mesenchymal stem cell, Laying hen 62 67 http://rap.sanru.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1778-1&slc_lang=fa&sid=1 Farhang Ahmadian فرهنگ احمدیان F.ahmadian1985@gmail.com 100319475328460022970 100319475328460022970 No Department of Animal Science, QaemShahr branch, Islamic Azad University, QaemShahr, Iran گروه علوم دامی، واحد قائم شهر، دانشگاه آزاد اسلامی، قائم شهر، ایران Mehrdad Irani مهرداد ایرانی M.irani1968@gmail.com 100319475328460022971 100319475328460022971 Yes Department of Animal Science, QaemShahr branch, Islamic Azad University, QaemShahr, Iran گروه علوم دامی، واحد قائم شهر، دانشگاه آزاد اسلامی، قائم شهر، ایران Abdollah Mohammadi Sangcheshmeh عبدالله محمدی سنگ چشمه amohammadis@ut.ac.ir 100319475328460022972 100319475328460022972 No Department of Animal Science, College of Aburaihan, University of Tehran, Tehran, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، پردیس ابوریحان، دانشگاه تهران، ایران