Research on Animal Production

fa شناسایی چند شکلی های ژن HSP70A1A در گوسفندان نژاد مهربان و رومانف با تکنیک PCR-SSCP Identification of Polymorphism in HSP70A1A Gene in Mehraban and Romanov Sheep Breeds using PCR-SSCP Technique ژنتیک و اصلاح نژاد دام ژنتیک و اصلاح نژاد دام پژوهشي Research <div style="text-align: justify;">     در اقلیم های مختلف، نقش مقاومت سلولی به استرسهای ناشی از تغییر دما از طریق خانوادهای از پروتئینها که اصطلاحاً، پروتئینهای شوک گرمایی (HSP) نامیده میشوند، کنترل می شود. در پژوهش حاضر، شناسایی چند شکلیهای تک نوکلئوتیدی موجود در مناطقی از ژن HSP70A1A در گوسفند بومی نژاد مهربان و گوسفند وارداتی نژاد رومانف به جهت ویژگی این نژادها به سازگاری در اقلیم های سردسیری، بررسی شدند. در مجموع، تعداد 141 حیوان شامل گوسفند نژاد مهربان (100 رأس) و گوسفند نژاد رومانف (41 رأس)، به طور تصادفی انتخاب و مراحل خونگیری و استخراج DNA طبق دستورالعملهای متداول انجام شد. سپس، واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR) جهت تکثیر اگزون ژن HSP70A1A (Oar_v4.0; Chr20, NC_019477.2) به اندازه 247 و 298 جفت باز انجام شد. همچنین، جهت تعیین چند شکلی نمونه ها از تکنیک PCR-SSCP و متعاقب آن، توالی یابی مبتنی بر سانگر استفاده شد. بر اساس نتایج SSCP، به طور مشابه در هر دو نژاد مهربان و رومانف تعداد 5 الگوی باندی مشاهده شد که قطعات تکثیر شده 247 و 298 جفت بازی به ترتیب دو و سه الگوی الکتروفوزی را دارا بودند. علاوه بر این، هیچ تفاوتی در فراوانی الگوهای مشاهده شده بین این دو نژاد گوسفند یافت نشد. همچنین، در این نژادها نتایج توالی یابی وجود تعداد 5 چند شکلی تک نوکلئوتیدی (SNP) شامل g.26562252C>A، g.26562261G>C، g.26562270T>C، g.26562273C>T و g.26562279C>T در قطعه 247 جفت بازی و تعداد سه چند شکلی تک نوکلئوتیدی شامل g.26561745T>C، g.26561784C>T و g.26561877G>A در قطعه 298 جفت بازی شناسایی نمود. در مجموع، نتایج نشان داد که، همه چند شکلیها به غیر ازg.26561745T>C  و g.26561877G>A به طور معنیداری خارج از تعادل هاردی واینبرگ هستند (05/0p<). به عنوان نتیجهگیری نهایی، با توجه به نقش پروتئینهای شوک دمایی در مقاومت به استرسهای محیطی، شناسایی این چند شکلیها می تواند تاثیر بسزایی در درک مکانیسم سازگاری  به تحمل دمایی در نژادهای گوسفندان بومی ایرانی داشته باشد.  </div> <div style="text-align: justify;">The heat shock proteins (HSPs) are a family of proteins contributing to cellular resistance against a variety of thermal stresses in different climates. In this study we aimed to characterize polymorphisms of the ovine HSP70A1A gene in Mehraban indigenous sheep breed and Romanov imported sheep breed, because they are well adapted to the cold climate. Blood samples were collected from a total of 141 sheep (100 Mehraban and 41 Romanov), and then genomic DNA was extracted according to conventional instructions. Polymerase chain reaction (PCR) was performed to amplify the 247 bp and 298 bp of the exon region of the HSP70A1A gene (Oar_v4.0; Chr 20, NC_019477.2). Also, polymorphisms of the studied fragments were explored using single strand conformational polymorphism (SSCP) technique and then the amplified DNA fragments were sequenced by Sanger sequencing method. In both Mehraban and Romanov breeds, five distinct SSCP patterns were identified that two and three electrophoretic patterns were respectively related to 247 bp segment and 298 bp segments. Furthermore, frequencies of SSCP patterns showed no differences between breeds. Five single nucleotide polymorphisms (SNPs) including g.26562252C>A, g.26562261G>C, g.26562270T>C, g.26562273C>T and g.26562279C>T were identified in 247 bp segment, and also, three SNPs including g.26561745T>C, g.26561784C>T and g.26561877G>A were identified in 298 bp segment of PCR products. Results revealed that all SNPs were in Hardy–Weinberg disequilibrium (p < 0.05), except of g.26561745T>C and g.26561877G>A. Considering the role of HSPs in resistance to the environmental stresses, it can be conclude that the identification of  these SNPs can  play an important role on understanding the mechanism of adaptation  to temperature tolerance among the Iranian indigenous sheep breeds.   </div> تحمل سرمایی, چندشکلی نوکلئوتیدی, ژن HSP70A1A, گوسفند رومانف, گوسفند مهربان Cold tolerance, HSP70A1A gene, Mehraban sheep, Polymorphism, Romanov sheep 169 179 http://rap.sanru.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1563-1&slc_lang=fa&sid=1 Ahmad Ahmadi احمد احمدی ahmadi@basu.ac.ir 100319475328460015236 100319475328460015236 Yes Bu-Ali Sina University, Hamedan, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا همدان Mahaya Mohammadizade محیا محمدزاده M.Mohamadzade1990@gmail.com 100319475328460015237 100319475328460015237 No Bu-Ali Sina University, Hamedan, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا همدان Pouya Zamani پویا زمانی zamani.p@gmail.com 100319475328460015238 100319475328460015238 No Bu-Ali Sina University, Hamedan, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا همدان Abbas Farah-avar عباس فرح آور farahavar@gmail.com 100319475328460015239 100319475328460015239 No Bu-Ali Sina University, Hamedan, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا همدان Reza Talebi رضا طالبی talere1986@gmail.com 100319475328460015240 100319475328460015240 No Bu-Ali Sina University, Hamedan, Iran گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه بوعلی سینا همدان و محقق بخش زیست شناسی سامانه ها، پژوهشگاه بیوتکنولوژی کشاورزی کشور، کرج، ایران