fa شناسایی جهش فقدان عملکرد p.Q579X موثر بر سقط جنین در ژن APAF1در گاوهای هلشتاین ژنتیک و اصلاح نژاد دام ژنتیک و اصلاح نژاد دام پژوهشي Research <div style="text-align: justify;"><span style="font-size:11px;"><strong>&nbsp;&nbsp; امروزه مشکلات تولید مثلی یکی از نگرانی&shy;های اصلی در صنعت گاو شیری است. هدف از پژوهش حاضر <span style="color:black;">شناسایی</span></strong> <strong>جهش فقدان عملکرد </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">p.Q579X</span></span></strong><strong> موثر بر سقط جنین خود به خودی و مشکلات تولید مثلی در ژن </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">APAF1</span></span></strong> <strong><span style="color:black;">با </span></strong><strong><span style="color:black;">روش توالی &shy;یابی در گاو هلشتاین بود. </span></strong><strong>&nbsp;در مجموع 200 نمونه خون تهیه و استخراج </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">DNA</span></span></strong><strong> با کیت تجاری انجام شد. سپس یک جفت آغازگر اختصاصی برای تکثیر قطعه &shy;ای با طول 456 جفت باز حاوی جهش مورد نظر طراحی و تعیین ژنوتیپ نمونه ها با روش </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">PCR-SSCP</span></span></strong><strong> انجام شد. <span style="color:black;">در جایگاه </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">APAF1</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"> دو آلل </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">A</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"> و </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">B</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"> و دو ژنوتیپ </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">AA</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"> و </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">AB</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"> به &shy;ترتیب با فراوانی &shy;های 96/76، 3/24، 93/51 و 6/49 درصد مشاهده شدند. ژنوتیپ </span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">BB</span></span></span></strong><strong><span style="color:black;"> در نمونه&shy; های مورد مطالعه مشاهده نشد.</span></strong><strong> بعد از تعیین ژنوتیپ نمونه&shy; ها، از هر ژنوتیپ دو نمونه به&shy; صورت دو طرفه توالی&shy;یابی&shy;شده و بعد از </strong><strong>هم&shy;ترازی توالی&shy; های به&shy; دست&shy; آمده، &nbsp;مقایسه آن&shy;ها با توالی رفرنس برای شناسایی جهش&shy; های مورد نظر با استفاده از نرم &shy;افزار </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">BioEdit (version7.0.9.0 )</span></span></strong><strong> صورت گرفت. نتایج بررسی&shy; های بیوانفورماتیک نشان داد که جهش </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">p.Q579X</span></span></strong><strong> که یکی از جهش &shy;های موثر بر سقط جنین در گاو هلشتاین می&shy; باشد در ژنوتیپ </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">AB</span></span></strong><strong> ژن </strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;">APAF1</span></span></strong><strong> در گاوهای هلشتاین در ایران وجود دارد. <span style="color:black;">با توجه به اینکه این جهش در حالت هموزیگوت باعث سقط جنین در گاو می&shy;شود، می &shy;توان نتایج حاصل</span></strong> </span><strong><span style="color:black;"><span style="font-family:2 Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"><span style="font-size:11px;">&shy; از این پژوهش را در برنامه &shy;های اصلاح نژادی در راستای شناسایی حاملین و حذف آن&shy;ها از گله گاوهای شیری هلشتاین به&shy; کار برد.</span> </span></span></span><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;"><span style="font-size:8.0pt;"></span></span></span></span></strong><span style="font-family:2 Mitra;"><span style="font-size:10.0pt;"><span style="color:black;"> </span></span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="color:black;"><span style="font-family:Times New Roman Bold,serif;"><span style="font-size:8.0pt;"></span></span></span></span></strong></div> &nbsp;<strong> </strong><strong><span dir="LTR"></span></strong> <div style="text-align: justify;">Today, reproductive problems are one of the major concerns in the dairy industry. The aim of this study was to detect the lack of function mutation of p.Q579X affecting spontaneous abortion and reproduction problems in APAF1 gene in Holstein cattle. In total, 200 blood samples were prepared and DNA was extracted with commercial kit. Then a specific pair of primers was designed to amplify a fragment with lengths of 456 bp from the exons 11 of the APAF1 gene and genotyping was performed by PCR-SSCP method. In APAF1 locus two alleles of A and B and two genotypes of AA and AB with frequencies of 96.76, 3.24 and 93.51 and 6.49 were observed, respectively. The BB genotype was not observed in the studied samples. After determining the genotype of the samples, two samples from each genotype were sequenced from both end and alignment of the obtained sequences and their comparison with the reference sequence from the gene bank to detect the mutation was carried out using BioEdit (version7.0.9.0) software. The results of bioinformatics analysis showed that the lack of function mutation of p.Q579X, which is one of the mutations affecting abortion in Holstein cattle, is present in the AB genotype of APAF1 gene in Holstein cattle in Iran. Given that this mutation causes abortion in cow in homozygous form, the results of this study can be directly used in breeding programs in order to identify the carriers of this mutation and culling them from Holstein dairy herd.</div> توالی یابی, ژن APAF1, سقط جنین, گاو هلشتاین Abortion, APAF1 gene, Holstein cattle, Sequencing 146 156 http://rap.sanru.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-400-6&slc_lang=fa&sid=1 Khazan Enayati خزان عنایتی khazanenayati@yahoo.com 100319475328460015230 100319475328460015230 No Department of Animal Sciences, Sari Agricultural Sciences and Ntural Resources University, Sari, Iran گروه علوم دامی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری Ayoub Farhadi ایوب فرهادی ayoub_farhadi@ymail.com 100319475328460015231 100319475328460015231 Yes Department of Animal Sciences, Sari Agricultural Sciences and Ntural Resources University, Sari, Iran گروه علوم دامی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری Ghodrat Rahimi-Mianji قدرت رحیمی میانجی rahimimianji@yahoo.com 100319475328460015232 100319475328460015232 No Department of Animal Sciences, Sari Agricultural Sciences and Ntural Resources University, Sari, Iran گروه علوم دامی، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری