دوره 8، شماره 16 - ( تابستان 1396 )
جلد 8 شماره 16 صفحات 144-137 |
برگشت به فهرست نسخه ها
چکیده: (3382 مشاهده)
بیماری ﺳﻞ ﻳﻜﻲ از ﺷﺎﻳﻊﺗﺮﻳﻦ ﺑﻴﻤﺎریﻫﺎی ﻋﻔﻮﻧﻲ اﺳﺖ. روشهای رایج تشخیص سل یا زمان گیر است یا از حساسیت و ویژگی کافی برخوردار نمیباشند. پادگنهای مختلف مایکوباکتریایی در واکنش با سامانه ایمنی میزبان دخیل هستند و میتوان از آنها برای تشخیص بیماری سل بهره جست. پادگن 60، درشت مولکول و مقاوم به حرارت است که در مایکوباکتریوم بویس و مایکوباکتریوم توبرکلوزیس وجود دارد. این پادگن در طراحی سیستمهای الایزا برای تشخیص بیماری سل استفاده میشود. هدف از این مطالعه خالصسازی پادگن 60 از سیتوپلاسم باکتری و ارزیابی و مقایسه کارایی آن با توبرکولین انسانی و استاندارد است. با کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون، پادگن 60 از دیگر اجزاء باکتری خالص گردید و در آگار ژل با استفاده از
Anti A60، Anti BCG، ایمنودیفیوژن و باند رسوبی، تشخیص داده شد. وزن مولکولی اجزاء پادگن 60 با الکتروفورز بدست آمد. با انجام کروماتوگرافی، هفت فراکسیون حاصل شد. در بررسی بلات نقطهای، مشخص گردید که سیتوپلاسم و دیواره سلولی دارای پادگن 60 میباشند. این تست نشان داد که فراکسیون یک، بیشترین شدت رنگی را ایجاد و در نتیجه بالاترین مقدار پادگن 60 در این فراکسیون بود. در آگار ژل ایمنودیفیوژن نمونه سیتوپلاسم و همه فراکسیونهای حاصل از کروماتوگرافی با Anti BCG واکنش مثبت نشان دادند و فراکسیون یک، بیشترین میزان رسوب را در بین هفت فراکسیون دیگر ایجاد نمود. وزن مولکولی اجزای پادگن 60 در محدوده 35، 38،40 و 65 کیلو دالتون تشخیص داده شد. نتایج واکنشهای حاصل از تزریق پادگن 60 و توبرکولین انسانی استاندارد بیانگر تأثیر گذاری مناسب این پادگن در قیاس با توبرکولین انسانی استاندارد بود. جستجوی پادتن در سرم بیماران روشی سریع و قابل تکرار است که با حساسیت 89% و اختصاصیت 94% میتواند ماده مناسبی برای تشخیص سل باشد. با این روش میتوان بدون مواد یا تجهیزات پیشرفته و گران قیمت، نتایج را به سرعت فراهم کرد.
Anti A60، Anti BCG، ایمنودیفیوژن و باند رسوبی، تشخیص داده شد. وزن مولکولی اجزاء پادگن 60 با الکتروفورز بدست آمد. با انجام کروماتوگرافی، هفت فراکسیون حاصل شد. در بررسی بلات نقطهای، مشخص گردید که سیتوپلاسم و دیواره سلولی دارای پادگن 60 میباشند. این تست نشان داد که فراکسیون یک، بیشترین شدت رنگی را ایجاد و در نتیجه بالاترین مقدار پادگن 60 در این فراکسیون بود. در آگار ژل ایمنودیفیوژن نمونه سیتوپلاسم و همه فراکسیونهای حاصل از کروماتوگرافی با Anti BCG واکنش مثبت نشان دادند و فراکسیون یک، بیشترین میزان رسوب را در بین هفت فراکسیون دیگر ایجاد نمود. وزن مولکولی اجزای پادگن 60 در محدوده 35، 38،40 و 65 کیلو دالتون تشخیص داده شد. نتایج واکنشهای حاصل از تزریق پادگن 60 و توبرکولین انسانی استاندارد بیانگر تأثیر گذاری مناسب این پادگن در قیاس با توبرکولین انسانی استاندارد بود. جستجوی پادتن در سرم بیماران روشی سریع و قابل تکرار است که با حساسیت 89% و اختصاصیت 94% میتواند ماده مناسبی برای تشخیص سل باشد. با این روش میتوان بدون مواد یا تجهیزات پیشرفته و گران قیمت، نتایج را به سرعت فراهم کرد.
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
تخصصي
دریافت: 1396/8/8 | ویرایش نهایی: 1396/8/20 | پذیرش: 1396/8/8 | انتشار: 1396/8/8
دریافت: 1396/8/8 | ویرایش نهایی: 1396/8/20 | پذیرش: 1396/8/8 | انتشار: 1396/8/8
فهرست منابع
1. Charpin, D., H. Herbault, M.J. Gevaudan, M. Saadjian, de P. Micco, A. Arnaud, D. Vervloet and J. Charpin. 1990. Value of ELISA using A60 antigen in the diagnosis of active pulmonary tuberculosis. Am Rev Respir Dis, 142: 380-4. [DOI:10.1164/ajrccm/142.2.380]
2. Cocito, C. 1987. Immonological properties of A60 of BCG induction of humoral and cellular immune reaction. Scand J Immunol, 25: 579-85. [DOI:10.1111/j.1365-3083.1987.tb01084.x]
3. Cocito, C. 1991. Properties of the mycobacterial antigen complex A60 and its application to the diagnosis and prognosis of TB. Chest, 100: 1687-93. [DOI:10.1378/chest.100.6.1687]
4. Cocito, C. and F. Vanlinden. 1986. Preparation and properties of antigen 60 from Mycobacterium bovis BCG. Clin Exp Immunol, 66: 262-72.
5. Cocito, C. and F. Vanlinden. 1988. Subcellular localisation and sedimentation behaviour of antigen 60 from Mycobacterium bovis BCG. Med Microbiol Immunol, 177: 15-25. [DOI:10.1007/BF00190307]
6. Coetsier, C., M.C. Baelden, M. Coene and C. Cocito. 1994. Immunlogical analysis of the companents of the antigen complex A60 of Mycobacterium bovis BCG. Clin Diagn Lab Immunol, 1: 139-144.
7. Davies, P.D.O. 1998. Clinical Tuberculosis chapman and Hall. (2nd Ed.) London, UK, 55-80 pp.
8. Dupont, C., K. Thompson, C. Heuer, B. Gicquel and A. Murray. 2005. Identification and characterization of an immunogenic 22 kDa exported protein of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis. J Med Microbiol, 54: 1083-92. [DOI:10.1099/jmm.0.46163-0]
9. Ferencik, M. 1993. Hand book of Immunochemistry, Chapman and Hall. (First Ed) New Delhi, Del, India, 336-341.
10. Gilot, P. and M. Coene. 1994. Thermostable macromolecular antigens from mycobacteria. Can J Microbiol, 40: 605-11. [DOI:10.1139/m94-097]
11. Guta, S., J. Casal, S. Napp, L. Saez, A. Garcia-Saenz,Perez, B. deVal, B. Romero, J. Alvarez and A. Alvarez. 2014. Epidemiological investigation of bovin tuberculosis herd breakdowns in Spain 2009/2011. PLoS One, 15: 74-81. [DOI:10.1371/journal.pone.0104383]
12. Harboe, M. and H.G. Wiker. 1992. The 38-kDa Protein of Mycobacterium tuberculosis: A Review. J Infect Dis, 166: 874-84. [DOI:10.1093/infdis/166.4.874]
13. Harris, E. and S. Angel. 1990. Protein purification methods: A practical approach; IRL Press at Oxford University Press. (First Ed) Oxford, pp: 200-310.
14. Hoeprich, P.D. 1983. Infectious disease Harper and Row. (3rd ed) Philadelfia, 122-40 pp.
15. Hubbard, R.D., C.M. Florry and C. Cocito. 1992. Immunization of mice with the Antigen A60 of Mycobacterium bovis BCG. Clin exp Immunol, 88: 129-31. [DOI:10.1111/j.1365-2249.1992.tb03051.x]
16. Kavid, N., R. Madani, S. Hosseinkhani, N. Mosavari, F. Golchinfar, T. Emam and R. Keshavarz. 2012. Evaluation of immunogenicity of purified cell wall-associated 34 kDa antigen of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection. Hybridoma, 31: 163-167. [DOI:10.1089/hyb.2011.0108]
17. Laemmli, U.K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage. T4. Nature, 227: 680-685. [DOI:10.1038/227680a0]
18. Lowry, O.H., N.J. Rosebrough, A.L. Farr and R.J Randall. 1951. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J Biol Chem, 1: 265-75.
19. Lozano, R. 2012. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet, 380: 2095-128. [DOI:10.1016/S0140-6736(12)61728-0]
20. Raplay, R. and J. Walker. 2008. Molecular Biomethods Hand book. (2nd Ed) Michigan, pp: 651-60.
21. Serena, T.E. 2014. A Global Perspective on Wound Care, 13: 548-52. [DOI:10.1089/wound.2013.0460]
22. Zeinali, M., M. Jammalan, S. Ardestani and N. Mosaveri. 2009. Immunological and cytotoxicological characterization of tuberculin purifiedprotein derivative (PPD) conjugated to single-walled carbon nanotubes. Immunology Letters, 126: 48-53. [DOI:10.1016/j.imlet.2009.07.012]
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |